由于寡核苷酸從頭合成長度的限制，通常采用DNA組裝技術、使用短寡核苷酸作為原料來構建更長的合成片段。常用的組裝方法包括全片段酶促連接法和酶促填充法。全片段酶促連接法利用DNA連接酶將具有5'磷酸化且重疊互補的寡核苷酸片段連接形成雙鏈DNA。酶促填充法基于聚合酶循環組裝(Polymerase Cycling Assembly，PCA)技術，使用DNA聚合酶將重疊的寡核苷酸延伸成雙鏈片段，通過overlap PCR獲取較長片段，然后將各片段一起組裝至載體上，最終構建出完整載體。

圖1.擎科生物基因合成流程圖

擎科生物的基因合成智能化生產平臺能夠實現1.5 kb以內短片段的自動化生產，有效減少人工操作失誤，大幅提高生產效率。客戶可以根據不同的應用需求選擇合適的載體骨架。擎科生物建立了一個準確規范的載體庫，提供160多個免費載體供選擇，并按需制備合格的線性化載體。同時，我們對客戶自備載體進行NGS測序驗證，確保序列準確，并提供免費存儲服務，方便后續使用。

擎科生物自主研發的高品質重組酶、聚合酶和感受態細胞，確保載體構建過程高質高效。全流程試劑控制確保每個環節的質量。載體與PCR片段的連轉反應由自動移液工作站操作，復蘇液通過自動涂布儀進行樣品涂布，并利用全自動菌落挑選儀篩選陽性克隆，支持二維碼和條形碼管理，大幅提高生產效率，減少人工失誤。擎科生物還自主開發了"磁珠法測序平臺"用于Sanger測序，確保目的序列100%準確，并采用創新的NGS測序技術——Fast NGS，保障全質粒序列的準確性。在智能化基因合成生產線的支持下，基因合成交付率超過99.5%，最快可在3天內完成交付。

最后讓我們一起深入了解擎科生物的智能化產線。以下這段視頻將展示從自動化序列分析到篩選、測序和質檢，每一步都在精密的控制下進行，確保基因合成的高效率和高質量。

(新媒體責編：wa12)